Biochemy

실험 주제: 추출한 pDNA 전기영동
실험 일시: 2017년 10월 27일 야간 1차
작성자:34기 한윤제
2017년 2학기 4번째 시간으로, 이번엔 저번 시간에 추출한 pDNA를 전기영동하여 분석하는 단계이다. DNA의 핵산은 음전하를 띄므로 (+)쪽으로 끌려가는 것을 이용한 것이다. 이 실험에 쓰인 아가로스 겔은 다공성 물질으로, 체처럼 작용하여 DNA를 크기순으로 분리한다.

실험 과정:
1. 1xTAE 100ml에 아가로스0.8g을 넣는다.
2. 전자레인지에 1분 30초간 가열하여 녹인다.
3. 틀에 콤을 꽂고 아가로스 용액을 20ml씩 부어서 굳힌다.
(콤이 바닥에 닿지 않도록 한다. 바닥에 닿으면 만들어진 겔에 구멍이 뚤린다.)
4. 파라필름에 2㎕ DNA용액 (저번 시간에 만든 것)을 놓고 ,2㎕ DNAmarker를 옆에 놓는다.
5. 6㎕ SDW를 넣고 섞는다.
6. 굳은 겔의 홈 부분에 넣는다.
7. 겔의 홈 중 하나에 DNA ladder를 놓는다.
8. DNA가 (-)로 오게 한 후 20분쯤 전기영동시킨다.
9. uv로 찍어 결과를 본다.

실험 주제: plasmid DNA 추출실험
실험 일시: 2017년 9월 24일 야간 1차
작성자: 34기 한윤제
2017 2학기 세 번째 시간이었다. 저번 실험에 이어서 오늘은 형질 전환 실험의 준비 단계로서 세균 세포에서 플라스미드 DNA를 추출했다. 플라스미드 DNA란, 세균 세포 내에 별도로 존재하며, 독자적인 증식을 하는 고리 모양의 DNA다. 생존에 필수적인 것은 아니며, 유전자 재조합 시 이것을 이용해 원하는 유전자를 집어넣는다.

실험 과정:
1. LB배지에 배양해놓은 콜로니를 접종하고 24시간 배양한다.
2. 마이크로튜브에 담긴 용액을 8000rpm 으로 2분간 원심분리한
후 상층액을 제거한다.
3. 그 튜브에 buffer 1을 250㎕ 넣고 바닥에 붙은 셀을 볼텍싱해서
섞는다.
4. 튜브에 buffer 2를 250㎕ 넣고 살살 3~4회 뒤집어준다.
(볼텍싱하면 일반 DNA까지 절편이 되어 추출될 수도 있다.)
5. 튜브에 buffer 3을 350㎕ 넣고 살살 3~4회 뒤집어준다.(하얀 게
떠다닌다.)
6. 8000rpm으로 1분간 원심분리한 후 상층액을 취한다.
7. DNA binding column에 넣고 8000rpm, 1분간 원심분리한 후,
하층액을 버린다.
9. buffer D를 500㎕ 넣고 5분 기다린다.
10.8000rpm으로 1분간 원심분리한 후 하층액을 버린다.
11.buffer 4(에탄올 포함됨)를 700㎕넣고 8000rpm으로 1분간 원심분리한다.
12.에탄올을 말리기 위해 8000rpm으로 5분간 원심분리한다.
13.뚜껑을 제거한 튜브에 말린 플라스미드 DNA를 꽂고 buffer 5를 100㎕ 넣는다.
14.1분 기다린 후 8000rpm에서 1분간 원심분리한다.
15.하층액만 분리해서 보관한다.

실험 주제: CaCl2를 이용한 competent cell 제작
실험 일시: 2017년 8월 25일 야간 1차
작성자: 34기 한윤제
2017 2학기 두 번째 시간이었다. 이번엔 선배님들이 실험 전에 열심히 준비해주셔서 조금 더 어려운 실험을 할 수 있었다.
박테리아는 세포벽에 펩티도글리칸 층이 있어 원하는 형질전환 유전자를 집어넣기가 힘들다.
그러므로 펩티도글리칸 층을 허무는 작업이 필요한데, 이것에 사용되는 것이 CaCl2이다.

선배님들이 먼저 해주신 작업:
1. LB배지에 3ml을 접종한 뒤 37℃에서 24시간 배양한다.
2. 배양액 1ml을 50ml LB배지에 넣고 3시간 배양한다.
3. 차가운 50ml 코니칼 튜브에 배양액을 넣는다.

동아리 시간에 한 작업:
4. 4℃에서 4000rpm으로 10분간 원심분리한다. (여기서 cell이 튜브 벽에 붙는다.)
(clean bench 안에서)
5. 상층액을 제거한다.
6. CaCl2를 넣어 30ml을 맞추고, 볼텍스를 사용하지 않고 살살 흔든다.(gently)
7. cell이 떨어지면 다시 4℃에서 4000rpm으로 10분간 원심분리한다.
8. 상층액을 버리고 1분 말린 뒤 2ml를 filtered CaCl2로 부유시킨다.
9. 미리 얼음에 담궈둔 et tube에 나누어 담는다.

34기 후배님들의 많은 관심과 지원 바랍니다.

실험 주제: Aspirin의 합성
실험 일시: 2016년 10월 13일 8~9교시
작성자: 33기 정규태

2016년도의 네 번째 동아리시간이다. 2학기 들어 처음으로 학술 동아리 활동일이기 때문에 워밍업으로 간단하면서도 의미는 많은 실험을 하게 되었다. 아스피린은 독일의 제약회사 바이벨의 아세트살리실산에 대한 상품명이나 현재는 관용명으로 널리 쓰인다.

살리실산에 아세트산을 더하고 진한 황산을 넣으면 산이 촉매로 작용하여 에스터화가 일어난다. 최종적으로 아세트 살리실산과 물이 형성된다. 하지만 우리 실험에서는 아세트산 대신 무수 아세트산을 사용하여 실험의 효율을 높이고자 했다. 살리실산과 무수 아세트산이 반응하게 되면 아세트살리실산과 아세트산이 나오게된다. 생성물을 반응물로 다시 쓸 수 있게 된다.

실험 방법

1. 1.5g의 살리실산을 유리관에 넣는다.
2. 유리관에 무수아세트산 1.5ml를 흘러내리면서 벽면의 살리실산을 모두 흘러내리도록 한다.
3. 촉매로 인산을 소량 가하여 촉매 작용을 하도록 한다.
4. 물중탕 장치로 70~80도를 유지하여 반응을 완결시킨다.
5. 어느 정도 결정이 생기면 깔때기에 거름종이를 사용하여 아스피린을 추출한다.

실험에서 만든 아스피린은 깔때기를 넘칠 정도로 양이 많았다. 진통 효과도 있고 혈전이 생기는 것을 막아주기에 당장 섭취하고 싶었지만 어디까지나 실험실에서 생산한 것이라 순도를 장담할 수 없어 효과는 측정하지 못했다.

실험 주제 : 영화 시청 (트랜센던스)
실험 일시 : 2016년 6월 2일 8~9교시
작성자 : 32기 이동현

2016학년도 세 번째 동아리 시간이었지만, 동아리 시간이 2학기 중반에 몰린 탓에 1학기 마지막 시간이 되었다. 쉬어가는 의미로 오늘은 실험을 하지 않고 생명과학과 정보과학의 영화인 트랜센던스를 시청하였다. 초월이란 의미의 '트랜센던스'는 인간이 스스로의 육체를 벗어나 뇌의 정보만을 가지고 모든 온라인 세계에 존재하게 되는 영화이다. 흥미진진하게 보았다.

- 줄거리 (출처 : 나무위키)
인류가 수억 년에 걸쳐 이룬 지적능력을 초월하고 자각능력까지 가진 슈퍼컴퓨터 '트랜센던스'의 완성을 목전에 둔 천재 과학자 '윌' (조니 뎁)은 기술의 발전은 인류의 멸망이라 주장하는 반 과학단체 'RIFT'의 공격을 당해 목숨을 잃는다. 연인 '에블린' (레베카 홀)은 윌의 뇌를 컴퓨터에 업로드 시켜 그를 살리는데 성공하지만, 또 다른 힘을 얻은 그는 온라인에 접속해 자신의 영역을 전 세계로 넓혀가기 시작하는데…

실험 주제 : DNA 추출 (과일과 채소에서 눈에보이는 DNA추출)
실험 일시 : 2016년 3월 31일 8~9교시
작성자 : 33기 김담희

2016학년도 바이오케미 두번째 동아리 시간. 첫 시간부터 바쁘게 실험을 해왔던 바이오케미, 오늘도 선뱌님들깨서 DNA추출이라는 실험을 준비해오셨다. 오늘 실험은 딸기, 파인애플, 브로콜리, 양파, 바나나에서 추출하는것을 목표로했다. 실험재료는 지퍼백, 막자와 막자사발, 과일과 채소 (가져와주신 선배님 감사합니다😍), 70%에탄올 소금물과 세제를 가지고 했다. 과육을 지퍼백에 넣어 잘개 으깬뒤에 거즈로 즙만 걸렀다. 그다음 소금물과 세제를 섞은 물을 유리막대에 흘려보낸다음 에탄올을 섞으면 DNA가 응고되었다. 알려주신대로 진행허니 하얀 침겉은 물체가 나무막대에 건져올려졌다. 중학교때에도 추출해본적있었지만 이럴개 눈에 확연히 보일줄은 몰랐다. 실험을 정리하면서 남은 과일도 먹고 늘 알찬 실험을 하니 정말 완벽한 동아리 이지 않은가😍😍😍😍😍😍😍

실험 주제 : 화학발광 (형광펜에서의 형광염료 추출)
실험 일시 : 2016년 3월 17일 8~9교시
작성자 : 32기 이동현

2016학년도 바이오케미 부원모집을 끝내고 첫번째 동아리 시간이었다. 첫날부터 바로 실험을 시작하였는데, 오늘했던 것은 '화학발광'이라는 화학 실험이었다. 본 실험의 목적은 형광펜에 함유되어 있는 형광염료를 추출하는 것이었다. 실험재료로 초록색 형광펜을 사용하였는데, 따라서 염료가 초록색 형광물질인 BPEA나 Perylen일 것이라고 추측하고 탄화수소 용매로 이를 추출하고자 하였다. (만약 Perylen이 형광물질로 포함되어 있다면, 이는 발암물질이고 심각한 공해물질이기 때문에 안전한 조건 하에서 실험을 진행하도록 하였다.) 어찌어찌 추출을 끝내고 자외선을 쬐어주니 하늘색(?) 청록색(?) 신비로운 형광빛을 내었다.