20/04/2020
Detection of SARS-CoV-2 using qRT-PCR
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1- Collect specimens (e.g. Nasopharyngeal swab)
2- Preserve specimens in the Viral Transport Medium (VTM)
3- Extract the viral RNA using a Viral RNA Mini Kit.
4- Prepare the qRT-PCR Mix (e.g. Superscript III one step RT-PCR).
5- Set the RT-PCR program and launch the reaction:
• Reverse transcription: 50 °C for 15 min (01 cycle)
• Denaturation: 95 °C for 3 min (01 cycle)
• Amplification: 95 °C for 15 s, 58 °C for 30 s (40-50 cycles)
• Cooling: 40 °C for 30 s and then 4 °C (∞).
qPCR Principle
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In quantitative PCR we usually use a specific fluorescent probe in addition to primers in order to detect the amplification of the target gene. The probe sequence is labeled at the 5’ end with a fluorescent reporter dye (F) and at the 3’ end with a quencher dye (Q). In case the probe does not anneal to a specific sequence, the fluorescent reporter will stay physically close to the quencher which will cause the quenching of the reporter’s fluorescence. However, if the probe anneals to a specific sequence on the target gene, it will be degraded by the 5’-3’ exonuclease activity of Taq DNA polymerase. The fluorescent reporter will be then released from the quencher which will be no longer close enough to absorb the emission from the reporter dye. The fluorescent signal is thus generated and detected by CCD camera in a LightCycler.
The threshold cycle or Ct value is the number of cycles required for the fluorescent signal to cross the fluorescence threshold (the real signal could so be distinguished from background signal). Ct level is inversely proportional to the amount of target RNA in the sample. The lower is the Ct level the bigger is the amount of target RNA in the sample.
Abbreviations
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qRT-PCR: quantitative Reverse Transcription-Polymerase Chain Reaction
cDNA: complementary DNA
F: fluorophore
Q: quencher
Ct: threshold cycle
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References
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1- Filion, M., 2012. Quantitative Real-Time PCR In Applied Microbiology. Norfolk: Caister Academic Press.
2- Corman VM, Landt O, Kaiser M. et al. Detection of 2019 novel coronavirus (2019-nCoV) by real-time RT-PCR. Euro Surveill. 2020;25(3):pii=2000045.
3- World Health Organization.
07/04/2020
Pré-requisitos:
- título de doutor na área de ciências biomédicas obtido há menos de 7 anos;
- experiência em imunologia, incluindo métodos de quantificação de anticorpos, processamento de células mononucleares periféricas de pacientes, técnicas de citometria de fluxo e cell sorting;
- experiência em biologia molecular, sendo uma grande vantagem a experiência prévia em expressão de anticorpos monoclonais humanos;
- domínio da língua inglesa (escrita e falada) e do português ou espanhol;
- disponibilidade para viagens (realização de trabalho de campo no estado do Acre).
A experiência com métodos de sequenciamento de DNA é desejável.
O selecionado receberá Bolsa de Pós-Doutorado da FAPESP que inicia em julho de 2020 e tem duração de 24 meses.
Mais informações:
http://www.fapesp.br/oportunidades/mapeando_a_disseminacao_de_sarscov2_dimensao_do_surto_dinamica_de_transmissao_desfechos_clinicos_da_infeccao_e_duracao_da_respostas_de_anticorpos_em_uma_pequena_cidade_amazonica/3570/
04/01/2019
A Fundação Hemopa está em alerta por causa da reduzida quantidade de bolsas de sangue em estoque.
Precisamos da solidariedade de cada um de vocês para continuar atendendo à demanda transfusional.
Leia mais em http://www.hemopa.pa.gov.br/site/noticias/em-alerta-hemopa-convoca-doadores-de-sangue/
17/10/2018
É com grande felicidade que a LAHH e a Liga Acadêmica de Genética do Câncer - LAGEC te convidam para o nosso primeiro evento juntos!
Ao longo das próximas semanas vamos postar mais informações.
A página Biomédicos em Construção é um dos nossos apoiadores, curtam lá!
| Data: 12 e 13 de novembro
| Local: Auditório Arlindo Pinto
| Horário: 14h às 18h
| Investimento: 15 reais individual / 50 reais grupo de 5
Inscrições por email:
Nome Completo e instituição
Banco do Brasil
Agência: 2946-7
C. Poupança: 36829-6
Variação: 94
Thony Julian S. Mota
Enviar comprovante de deposito anexo a inscrição
Para mais informações:
(91) 98029-7899 (Vinicius)
(91) 98215-0313 (Deyse)
(91) 98178-8692 (Erika)
17/05/2018
O Instituto Evandro Chagas torna público o Edital para seleção de Projetos/Planos de Trabalho no âmbito do Programa de Iniciação Científica PIBIC/IEC/CNPq.
Acesse o edital completo AQUI: http://www.iec.gov.br/portal/pibic-2018-2019/
15/05/2018
Por que as mitocôndrias têm o seu próprio DNA?
Este é um dos grandes mistérios da biologia celular: por que as mitocôndrias – estruturas com formato oval que dão energia às nossas células – têm seu próprio DNA, e por que elas contin…
09/05/2018
Está sendo inaugurada a LAHH, ela tem como objetivo, a difusão de conhecimento e melhorar o desempenho acadêmico e profissional de acadêmicos da área da saúde. Curta a página para ficar por dentro das palestras e seminários promovidos.
Liga Acadêmica de Hematologia e Hemoterapia
A L.A.H.H, tem o objetivo de pesquisa, estudo e desenvolvimento profissional, de acadêmicos área da saúde com ênfase na hematologia.
16/05/2017
Hoje começa a campanha para Doação de Sangue no HEMOPA, da turma de Biomedicina 3DMD da UNAMA. Não fique de fora. DOE SANGUE, DOE VIDA!
11/11/2016
Hoje estivemos no hospital Ophir Loyola, fazendo doações de lenços (turbantes) e bonés para pacientes que fazem tratamento quimioterápicos!
No dia 25 de Novembro, irá acontecer a confraternização deles e queremos estar lá novamente, mas precisamos da ajuda de vocês! Quem puder doar turbantes ou bonés (principalmente turbantes) entre em contato conosco! Nós ficaríamos agradecidos!